Нітрозаміни – молекули, які містять нітрозофункціональну групу. Вони добре відомі завдяки високомутагенним забруднювачам, що формуються внаслідок реакції вторинних амінів з нітритом у кислотних умовах. Настанова ICH M7 (R1)
Вчені роками вивчали негативний вплив понад 300 видів нітрозамінів, більше ніж 90% з яких виявляють канцерогенність щодо різних тварин. Вміст нітрозамінів контролюють у харчових продуктах, косметичних і тютюнових виробах, розчинниках та алкогольних напоях. Відповідно до Настанови ICH M7 (R1) нітрозаміни належать до 1-го класу забруднювачів. Крім того, разом із афлатоксиноподібними речовинами, азоксисполуками та діоксинами вони є частиною сумнозвісної «когорти, що викликає занепокоєння».
Контроль нітрозамінів
Нітрозаміни дуже легко формуються в результаті взаємодії вторинних або третинних амінів з анітрозуючим агентом. Нітрити або аміни можуть бути виявлені як ненавмисні забруднюючі речовини в сировині, реагентах та розчинниках, що використовують під час виробничих процесів, і здатні призвести до утворення нітрозамінів у кінцевих лікарських та косметичних продуктах. З цієї причини введено обов’язковий контроль залишкових кількостей нітрозамінів у лікарських та косметичних продуктах. Загалом рівень залишкового вмісту нітрозамінів не має перевищувати 30 ppb, але це вираховують індивідуально для кожного препарату, виходячи з його максимальної добової дози.
FDA опублікувала низку рекомендованих методик для визначення нітрозамінів у фармацевтичних препаратах (таблиця).
Для аналізу найбільшої кількості нітрозамінів (8 шт.) найчутливішим є метод 138617, в якому використовують мас-спектрометрію високої роздільної здатності – прилад типу «орбітальна іонна пастка» (Orbitrap).
Аналіз нітрозамінів
Опублікована нова загальна стаття Європейської фармакопеї про аналіз нітрозамінів – 2.5.42. N-Nitrosamines in active substances. Основні домішки, що контролюються відповідно до неї (7 шт.): NDMA, NDEA, NDBA, NMBA, NDiPA, NEiPA та NDPA. Чутливість аналізу за статтею також має бути нижче 30 ppb.
Використовують методи ГХ/МС, ГХ/МС/МС та ВЕРХ/МС/МС, причому жоден із них не призначений для визначення всіх видів нітрозамінів:
- найбільшу кількість (6) компонентів за цією статтею визначають за допомогою методу ГХ/
МС/МС; - далі йде метод ВЕРХ/МС/МС, який застосовують відповідно до 5 видів домішок;
- метод ГХ/МС призначений лише для аналізу NDMA та NDEA.
Метод газової хроматографії-мас-спектрометрії (ГХ/МС)
Найпростішим методом визначення двох основних нітрозамінів – NDMA та NDEA – є ГХ/МС з паро-фазним інжектуванням. Обидва вказані нітрозаміни є леткими сполуками, що легко переходять у парову фазу.
Межа кількісного визначення методу, що розроблений на обладнанні виробництва компанії Thermo Scientific, є набагато кращою, ніж така європейських методик та методик FDA, розроблених на аналогічному обладнанні інших виробників.
Якщо перед вами стоїть задача визначити лише два зазначених основних нітрозаміни – рішення на базі ГХ/МС ISQ™ 7610 буде ідеальним за співвідношенням ціна/якість та забезпечить чутливість з урахуванням сучасних регуляторних вимог.
Метод газової хроматографії та тандемної мас-спектрометрії (ГХ/МС/МС)
Методи з використанням тандемної мас-спектрометрії надають дві можливості: парофазне інжектування для найбільш летких нітрозамінів та пряме рідинне інжектування з попередньою підготовкою проби для більш широкого переліку компонентів в одному аналізі.
Компанія Thermo Scientific опублікувала метод визначення чотирьох нітрозамінів (NDMA, NDEA, NDIPA, NEIPA) за допомогою мас-детектора TSQ™ 9000 з парофазним пробовідбірником TriPlus™ 500 HS. Він є аналогічним методу 124025 від FDA, але має ліміт кількісного визначення (від 2 до 10 ppb) та ліміт детектування 2 ppb, що від 5 до 20 раз чутливіший за метод FDA, розроблений на аналогічному обладнанні інших виробників.
Метод, опублікований компанією Thermo Scientific для мас-детектора TSQ™ 9000 з рідинним інжектуванням для п’ятьох нітрозамінів, має ліміт кількісного визначення (від 0,5 до 1 ppb) та ліміт детектування (від 0,2 до 0,5 ppb), що значно перевищує вимоги, які висуваються до максимального вмісту нітрозамінів та ліміту кількісного визначення методу.
Метод рідинної хроматографії з тандемним мас-спектрометричним детектуванням
На мас-спектрометричних детекторах виробництва компанії Thermo Scientific розроблено метод, що включає лише чотири етапи підготовки проби: подрібнення таблетки, екстрагування стряхуванням у водному розчині, центрифугування та фільтрування зразка. LOQ методу NDMA (леткого та складного для визначення за допомогою рідинної хроматографії компонента) на найменш чутливому з сучасної лінійки тандемних квадрупольних мас-детекторів становить 0,3 мкг/кг. Користувачі обладнання Thermo Scientific з Індії та Кореї опублікували методики визначення шести та одинадцяти нітрозамінів в одному аналізі. При цьому чутливість методик становила від 0,25 до 1 ppb абсолютної концентрації, що також значно перевищує дані опублікованих методів, розроблених на аналогічному обладнанні інших виробників.
Метод рідинної хроматографії з мас-спектрометричним детектуванням високої роздільної здатності приладом типу «орбітальна іонна пастка»
Готові лікарські препарати є досить складною матрицею, що містить велику кількість компонентів, які заважають проведенню аналізу. Іноді нітрозаміни виходять майже одночасно з піком АФІ, інколи піки інтерференцій спотворюють кількісні результати визначення нітрозамінів. Наприклад, 15N ізотоп диметилформаміду має m/z 75,0570, а моноізотопний пік NDMA – m/z 75,0553, і розділити їх за допомогою звичайних триквадрупольних детекторів неможливо. Використання детектора типу Orbitrap дозволяє ефективно відділяти нітрозаміни від АФІ або інтерференцій навіть для складних зразків, у той час як унікальний дизайн орбітальної пастки забезпечує чутливість на рівні триквадрупольних детекторів. Це робить Orbitrap ідеальним вибором для типів аналізу, що вимагають одночасно й ефективного розділення й чутливості на рівні нанограмів.
Використання мас-детекторів високої роздільної здатності типу Orbitrap є єдиною можливістю отримати результати щодо всіх нітрозамінів на одному приладі і є ідеальним вибором для мультикомпонентного аналізу з високою чутливістю для найскладніших матриць.
Кожна фармацевтична лабораторія може обрати свій метод визначення нітрозамінів: ГХ/МС, ГХ/МС/МС, ВЕРХ/МС/МС відповідно до власних потреб та в межах виділеного бюджету. Компанія Thermo Fisher Scientific пропонує різноманітні прилади, що допоможуть ефективно виявити забруднювачі різних типів та забезпечать якість кінцевого продукту.
У разі виникнення запитань або для отримання детальної інформації звертайтеся за адресою:
chromatography@alt.ua
АЛТ Україна ЛТД»
бізнес-частина будівлі ТРЦ «KOMOD»
Київ, вул. Митрополита Андрія Шептицького
(колишня Луначарського), 4
Тел.: +38 044 492-72-70 (багатоканальний)
https://alt.ua/
