Настольный прибор для экспресс-анализа биологической активности субстанций при разработке новых фармпрепаратов на основе анализа метаболизма живых клеток
Некоторые из самых значительных открытий, сделанных в течение последнего десятилетия, были связаны с изучением метаболизма, одного из важнейших биологических процессов в клетке. Измерение активности энергетического метаболизма – самый простой тест, цель которого – быстро получить отклик здоровых и больных клеток на внесение в их среду обитания субстанций, исследуемых для определения их биологической активности.
Анализатор Agilent Seahorse XF (рис. 1) – это золотой стандарт для исследования энергетического метаболизма в живых клетках. Анализатор одновременно измеряет показатели двух основных путей получения клеточной энергии: митохондриального дыхания и гликолиза. Исследования проводят на живых клетках в микролуночном формате в режиме реального времени (рис. 2).
В процессе гликолиза клетки генерируют АТФ без участия кислорода с побочными продуктами в виде лактата и протонов.
Метод измерения интенсивности гликолиза заключается в фиксации показателей внеклеточного закисления протонами (extracellular acidification rate – ECAR), являющегося побочным процессом при гликолизе.
Окислительное фосфорилирование (клеточное дыхание) – это процесс, который происходит на внутренней митохондриальной мембране с участием молекул кислорода и цепи переноса электронов. С помощью анализатора Agilent Seahorse XF Analyzer оценивают интенсивность митохондриального дыхания, фиксируя скорость поглощения клетками кислорода.
Для работы на этом уникальном анализаторе подходят практически любые типы клеток, включая первичные клетки, адгерентные и клетки в суспензии.
• Инъекционные порты, интегрированные в микрокамеры прибора, позволяют добавлять до 4 компонентов в каждую реакционную лунку в автоматическом режиме (реагенты, субстанции, ингибиторы и т.п.) (рис. 3)
• Сенсорные датчики опускаются в реакционную среду максимально близко к клеточному слою для проведения точных и чувствительных измерений
• Внутренние оптические микросенсоры одновременно измеряют уровень поглощения кислорода и выделения протонов во внеклеточную среду
• Объем и конструкция лунок микропланшета (200 мкл) позволяют использовать для анализа совсем небольшое количество клеток (в 10 – 20 раз меньше в сравнении с обычными респирометрами)
• Лунки микропланшета сконструированы таким образом, что позволяют проводить исследования практически на любых типах клеток в режиме реального времени
Инновационная технология анализа клеточного метаболизма Seahorse теперь доступна каждой лаборатории. Компактная и удобная платформа Agilent Seahorse XF Analyzer делает анализ проще и быстрее, а интуитивное программное обеспечение «Wave» позволяет интерпретировать данные метаболических исследований любому специалисту, даже не являющемуся экспертом в клеточном метаболизме.
